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凝膠成像,經(jīng)典知識剖析(二)
  • 發(fā)布日期:2022-04-28     信息來源:      瀏覽次數(shù):1947
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡單介紹一下凝膠成像,經(jīng)典知識剖析(二):

      一. 多種光源可選
      一般的凝膠成像系統(tǒng),提供 302nmUV、254nmUV、365nmUV、藍(lán)光及白光光源。
      ① 安全防護隔離
      觸摸控制電源開關(guān)、光源控制、光圈、聚焦等觀察和拍攝工作,實現(xiàn)污染現(xiàn)場和電腦操作現(xiàn)場隔離,防止交叉污染,確保操作者安全,抽屜式樣品載物臺,方便取放樣品。
      ② 直接切膠

      凝膠成像系統(tǒng)也可直接切膠,操作應(yīng)遵循說明書的指示,尤其注意對激發(fā)光源(無論是紫外,光或者藍(lán)光)進(jìn)行相應(yīng)的防護。


      二. 應(yīng)用范圍  
      從整體總的來說凝膠成像(系統(tǒng))可應(yīng)用于:蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析
      ① 分子量定量
      對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計要準(zhǔn)確很多。
      ② 密度定量
      一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
      ③ 密度掃描
      在分子生物學(xué)和生物工程研究中,我們*常用到的是對蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。傳統(tǒng)的方法就是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結(jié)合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。
      ④ PCR定量
      PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分?jǐn)?shù)。就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在原理上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進(jìn)行相對密度定量并計算其占總和的百分?jǐn)?shù),密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。


      圖像處理界面

      凝膠成像結(jié)果

      三. 注意事項
        1、開關(guān)抽屜時防止將EB沾在抽屜或暗箱上,如不慎沾上EB,擦干后用水沖洗;
        2、透射板紫外燈壽命有限,調(diào)整圖象后及時成像;
        3.、若長時間不進(jìn)行操作,機箱總電源將在10分鐘后關(guān)閉;
        4、拍攝時,請注意不要將過量的緩沖液傾倒在投射底座上;
        5、凝膠應(yīng)及時清理,防止凝膠固化后貼附在透射板上,造成成像不清晰;
        6、實驗完畢以后請不要將暗箱式抽屜*關(guān)閉,以保證暗箱內(nèi)空氣暢通;
        7、請勿用該電腦處理文檔等,如需拷貝圖片,請將移動盤格式化后再插入;
        8、請注意保管好軟件加mi狗和軟件光盤,以免遺失。

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于凝膠成像,經(jīng)典知識剖析(二)。
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