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凝膠成像分析的使用范圍分析說明
  • 發(fā)布日期:2017-05-19     信息來源:      瀏覽次數(shù):2173
    •      凝膠成像分析用于對(duì)電泳凝膠圖像的分析研究,采用數(shù)字?jǐn)z像頭將置于暗箱內(nèi)的電泳凝膠在紫外光或白光照射下的影像取進(jìn)計(jì)算機(jī),通過相應(yīng)的凝膠分析軟件,可一次性完成DNA、RNA、蛋白凝膠、薄層層析板等圖像的分析,zui終可得到凝膠條帶的峰值、分子量或堿基對(duì)數(shù)、面積、高度、位置、體積或樣品總量。

          凝膠成像分析是帶暗箱的分析儀,由紫外透射燈箱、白光燈箱、暗箱、攝像頭、計(jì)算機(jī)系統(tǒng),凝膠分析軟件等組成,可在明室中操作。該儀器配備白光光源及三種波長的紫外光源,您可根據(jù)自己的需要,單獨(dú)使用其中某個(gè)波長的光源,亦可同時(shí)使用幾種波長光源。
          總體上來說凝膠成像分析可應(yīng)用于:凝膠成像系統(tǒng)可以用于:蛋白質(zhì)、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結(jié)果作定性分析
          (1)分子量定量
          對(duì)于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對(duì)膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動(dòng)生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結(jié)果較肉眼觀察估計(jì)要準(zhǔn)確很多。
          (2)密度定量
          一般常用的測定DNA和RNA濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個(gè)長度片段的濃度。凝膠成像分析利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)條帶進(jìn)行密度標(biāo)定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據(jù)與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對(duì)PA GE蛋白膠條帶的濃度測定。
          (3)密度掃描
          在分子生物學(xué)和生物工程研究中,zui常用到的是對(duì)蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個(gè)菌體蛋白的百分含量的計(jì)算。傳統(tǒng)的方法是利用的密度掃描,但利用生物分析軟件結(jié)合現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項(xiàng)工作。
          (4)PCR定量
          PCR定量主要是指,如果PCR實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計(jì)算出各個(gè)條帶占總體條帶的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。就此功能而言,凝膠成像分析與密度掃描類似,但實(shí)際在原理上并不相同。PCR定量是對(duì)選定的幾條帶進(jìn)行相對(duì)密度定量并計(jì)算其占總和的百分?jǐn)?shù),密度掃描時(shí)并對(duì)選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。

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